皮肤荧光糖尿病研究设计和方法

2001 年 5 月至 2002 年 5 月期间，973 名初级保健 2 型糖尿病患者被纳入研究队列，并进行了皮肤自发荧光测量。纳入的患者都参与了 Zwolle 门诊糖尿病项目整合可用护理 (ZODIAC) 研究的共享护理项目，并且在其他地方也有描述 ( 11 )。在随访期间，本研究分析了 967 名患者的数据（6 名患者失访）。86 名患者在随访结束前死亡，该亚组将与幸存的 881 名患者分开处理。与帕特里克等级V-VI的皮肤类型的患者被排除，因为自发荧光读取器的限制在深色皮肤类型（精确测量的13 - 15）。所有参与的患者每年至少访问一次门诊。随访于2005年1月结束。所有纳入患者均已获得知情同意，并获得当地伦理委员会的批准。

皮肤自发荧光

荧光光谱仪自发荧光读取器（当前 AGE 读取器的原型；DiagnOptics，格罗宁根，荷兰）照亮约 4 cm 2的皮肤表面，防止周围光线，具有峰值强度在~370 nm 的激发光源。使用玻璃纤维，使用光谱仪在 300-600 nm 范围内测量来自皮肤的发射光和反射激发光。通过将 420-600 nm 发射光谱的平均光强度除以 300-420 nm 激发光谱的平均光强度，乘以 100 并以任意单位 (AU) 表示，计算自发荧光。所有患者的皮肤自发荧光均在手臂掌侧、肘部皱襞下方 10 cm 处进行评估。六名糖尿病专科护士使用两个相同的自发荧光读取设备进行自发荧光测量。自发荧光阅读器已经过验证，并且在之前的研究中得到了更广泛的描述（9 ,11 )。

数据收集

在基线皮肤自体荧光测量时获得临床数据和实验室结果。荧光光谱仪进行测量，根据标准实验室程序测量血清肌酐、非空腹血脂（总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯）以及尿白蛋白和肌酐。A1C 是用 Primus CLC-385 使用硼酸盐亲和色谱法和高效液相色谱法测量的（参考值 4.0-6.0%）。血压测量是在患者坐位休息 5 分钟后使用无液装置进行的单次测量。在每次门诊和随访结束时，评估是否存在视网膜病变、神经病变和（微）白蛋白尿。

临床终点

总体临床终点是任何糖尿病相关微血管并发症的发生，根据美国糖尿病协会的定义，其定义为存在以下至少一种糖尿病并发症：视网膜病变、神经病变和/或（微）白蛋白尿( 16）。单一临床终点被描述为视网膜病变、神经病变或（微）白蛋白尿的发展。视网膜病变由眼科医生根据视网膜摄影确定。假设至少存在背景性视网膜病变意味着视网膜病变。使用 5.07/10 g Semmes-Weinstein 单丝检查神经病变，该单丝应用于双脚背三个不同的非胼胝区域（第一脚趾和第一和第五跖骨远端）。荧光光谱仪测得数据，在敏感性降低的情况下考虑神经病变，这被定义为在每个区域进行三次应用（两次真实应用和一次虚假应用）后至少有两次不正确的反应（17 , 18）。基线时的（微量）白蛋白尿定义为，在基线时使用 ACEI 时，在随后的两次尿液样本中或基线前一年中的男性白蛋白与肌酐比 >2.5 mg/mmol 和女性 >3.5 mg/mmol ( 19 )。随访时新出现的（微量）白蛋白尿被定义为在两个尿液样本（一个在前一年和一个在当前随访期间）或在随访结束前一年使用ACE抑制剂时白蛋白/肌酐比值异常水平。

统计分析

使用事后多重比较（使用 Bonferroni 校正）的单向方差分析用于比较 881 名幸存患者的微血管并发症亚组之间的平均皮肤自发荧光。亚组如下：1 )基线或随访时无微血管并发症，2 )基线时无微血管并发症，但随访时有微血管并发症，和C )基线和随访时有微血管并发症。

进行单变量和多变量多项回归分析以确定皮肤自发荧光与微血管疾病的存在或发展之间的关系。在基线或随访时没有微血管并发症迹象的患者构成了这些计算中的参考类别。在多变量分析中，我们控制了微血管并发症发展的潜在混杂风险因素，这些因素来自 UKPDS 的发现，包括性别、糖尿病病程、A1C、当前吸烟、收缩压、HDL 胆固醇、LDL 胆固醇和甘油三酯，加上BMI（4）。

在单变量和多变量分析中计算了皮肤自发荧光的比值比 (OR) (95% CI)。P值<0.05被认为具有统计学意义。